CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO
INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 199
PROFESOR: DR. VICENTE MARTÍNEZ FRAGOSO
Alumna: Cynthia Citlally
Pérez Bautista
ESPECIALIDAD: LABORATORISTA CLÍNICO
Materia: procesar cultivos bacteriologicos
4°DM
Objetivo
Aprender las técnicas
para poder saber preparar un frotis de fijación y coloración mas utilizados, así
como identificar los diferentes tipos de bacterias
Fundamento
Debido al pequeño tamaño de la
mayoría de los microorganismos, se requiere de un microscopio óptico, ya sea de
campo claro o de campo oscuro para poder realizar la descripción de estos.
El microscopio más común es el de
campo claro, en el cual la observación de células vivas es limitada, debido a
que estas son incoloras y permiten el paso de un gran cantidad de luz.
Debido a este factor, la observación
de frotis teñido es más recomendable.
Se denomina frotis a la extensión que
se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar
lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la
preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe
ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los
métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las
bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados.
Los frotis de cultivos líquidos se
deberán fijar con alcohol para evitar residuos del medio que al quemarse darán
interferencias en las observaciones y los de colonias de
medios sólidos se fijan generalmente con calor.
SUSTANCIAS:
Ø
v Azul de metileno
v Alcohol etílico
v Fenol
Muestra
biológica: heces fecales frescas y orina
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MATERIAL
v Mechero de Bunsen
v Asa de
siembra
v Portaobjetos
v Microscopio
v Pizeta
v Tubos de ensayo
v Centrifuga
Preparación de frotis:
1.-Lavar y secar perfectamente los portaobjetos
1.-Lavar y secar perfectamente los portaobjetos
2.-Limpiar
la mesa con fenol
3.-Prender
el mechero y esterilizar el asa en la flama del mechero hasta que se ponga al
rojo vivo
4.- Dejar
enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra los microorganismos sean
destruidos. Después acercar al mechero el tubo de cultivo, quitarle el tapón y
flamear rápidamente la boca del mismo, introducir el asa en el tubo de cultivo
y tomar cuidadosamente la muestra
5.- Para
el caso de cultivos líquidos, colocar la muestra en el centro del portaobjetos,
extender suavemente en una área circular de 2 cm de diámetro aproximadamente y
esterilizar nuevamente el asa. Dejar secar el frotis al aire
6._Si
el cultivo es en medio solido, previamente se colocará en el centro del
portaobjetos una gota de agua destilada en la que se mezcla una pequeña muestra
del cultivo que se toma siguiendo las indicaciones del paso 4, extenderla
suavemente y dejar secar al aire
7.- con
una pipeta pasteur tomamos un poco de orina y la pasamos a un tubo de ensayo y
lo centrifugamos a 3000rpm durante 5 minutos.
8.- como
hubo sedimento en la orina decantamos un poco y con la asa flameada tomamos un
poco de la muestra y lo colocamos en el frotis
9.-Llenamos a la mitad
un tubo de ensayo con agua destilada. Con un aplicador tomamos un poco de
muestra de heces y esta la disolvimos en el agua
10.-Del
tubo de agua con un poco de heces disueltas, se flamea el asa, se mete al
tubo y tomamos un poco de muestra y lo
colocamos en un portaobjetos
fijación del frotis:
1. Fijar
los frotis de cultivos líquidos con dos gotas de metanol o etanol absoluto y
dejar secar al aire (hacer esto en zonas alejadas del mechero)
2. Los
frotis de cultivos sólidos, completamente secos se fijaran con calor. Para esto
se pasará el frotis rápidamente 2-3 veces en el interior de la parte amarilla
de la flama del mechero
3. Palpar
la parte inferior del portaobjetos con el dorso de la mano izquierda para
enfriar y comprobar que no hubo sobrecalentamiento.
Tinción simple:
1. Cubrir
el frotis con 2 gotas de azul de metileno durante 30 segundos a 1 minuto
2. Eliminar
el exceso de colorante con lavado de agua y despues se deja secar al aite
OBSERVACIONES
Frotis cultivo agar sangre 10x
el cultivo era de exudado vaginal, asi que encontramos Gardnerella
vaginalis
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100x
En el frotis de orina Observamos células epiteliales,también observamos bacilos de Escherichia
coli
en el frotis de eses encontramos e.coli
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CONCLUSIÓN
Es importantes saber cuales son los
pasos para poder realizar los frotis ya que si no se hacen bien podemos
equivocarnos al dar los resultados a los pacientes
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La Gardnerella Vaginalis es un microorganismo Gram negativo, que en la colonización vaginal patológica puede estar acompañado también por microorganismos aerobios, anaerobios y otros gérmenes: Infecciones del Tracto Genital Inferior (ITGI), o antes: Vaginosis Bacteriana (VB).
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Fuentes consultadas:
· Gardnerella
vaginalis, consultado el día 5 de marzo del 2012, enhttp://html.rincondelvago.com/gardnerella-vaginalis.html
· Preparación
de frotis bacteriano, consultado el día 6 de marzo 2012 enhttp://www.joseacortes.com/practicas/frotisbact.htm
· Manual
práctico de Microbiología ambiental, consultado el 8 de marzo 2012 en http://es.scribd.com/doc/57234084/27/TINCION-SIMPLE
